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散结乳癖膏对卵巢囊肿大鼠血清E2、P 的影响

发布时间:2014-06-02 10:58:00点击来源:鹤翔制药

王秋玲1  苏云明1  周金2  王春雷2
 

(1、黑龙江中医药大学,黑龙江哈尔滨150040  2、黑龙江省鹤翔制药有限责任公司,黑龙江齐齐哈尔) 
 

摘要:目的:通过建立卵巢子宫内膜异位囊肿大鼠模型,观察大鼠用药前后血清中雌激素(E2)、孕激素(P)含量的变化情况,初步探讨散结乳癖膏对卵巢囊肿大鼠的影响及其作用机制。方法:采用手术的方法建立动情期大鼠实验性卵巢囊肿模型,观察散结乳癖膏对模型大鼠血清中雌激素(E2)和孕激素(P)含量的影响。结果:散结乳痹膏对卵巢子宫内膜异位大鼠雌激素(E2)、孕激素(P)均有不同的下调和抑制作用,各剂量组与模型组比较差异有显著性意义(  P <  0.05),结论:散结乳痹膏可以通过对内分泌的调节作用改善卵巢囊肿大鼠血清中激素水平,对卵巢囊肿有一定的抑制作用。 
 

关键词:卵巢囊肿;散结乳癖膏;雌激素(E2);孕激素(P) 

 

  卵巢囊肿是指生长在女性卵巢的囊性肿物,而大部分的卵巢囊肿多为良性,是女性的常见病、多发病 [1]中医上卵巢囊肿大多由气滞血瘀、脾虚湿阻所致,同时中药治疗能有效的促进囊肿的吸收以及消散,并且副作用较少,也可避免因手术给患者带来的生理以及身体上的伤害 [2][3]。本实验用散结乳癖膏作用于卵巢子宫内膜异位囊肿模型大鼠,通过观察激素水平探讨其治疗卵巢囊肿的作用机制。 
 

  1 实验材料 
 

  1.1 实验动物。Wistar大鼠,体重200±20g,雌性未孕,长春市亿斯实验动物技术有限责任公司合格证:SCXK(吉)2011-0004。 
 

  1.2 主要试剂与仪器。氯化钠注射液,哈尔滨三联药业有限公司,生产批号:111020C5。乙醇:齐齐哈尔市鹤城消毒剂厂,批准文号:黑药准字(2002)第100001号。复方酒精消毒液:齐齐哈尔市双鹤消毒产品开发有限公司,批准文号:卫消字(2007)第0160号。雌激素,放射免疫试剂盒,潍坊三维生物工程集团有限公司。孕激素,放射免疫试剂盒,潍坊三维生物工程集团有限公司。Microfuge18Centrifuge离心机,德国BeckmanCoulter。HH•S•11型电热恒温水浴锅,上海跃进医疗器械厂。 
 

  1.3 实验药物。散结乳癖膏,成分为:莪术、姜黄、急性子、天葵子、木鳖子、白芷;深黄色膏状,由黑龙江省鹤翔制药有限责任公司提供。批号:第120504号,对照品基质,为蜂蜡麻油等容积(1:1)混合物,有黑龙江省鹤翔制药有限责任公司提供。 
 

  2 实验方法与步骤 
 

  2.1 卵巢囊肿大鼠模型的建立。雌性成熟wistar大鼠,对其进行阴道脱落学检查,连续4次以上动情周期规律的大鼠才列为造模对象,用10%水合氯醛以350mg/kg的剂量腹腔注射麻醉大鼠,大鼠麻醉后,将其背位固定于手术板上,腹部剃毛,75%乙醇消毒皮肤,于腹中线上距耻骨联合1cm处作2-3cm长的纵形切口,暴露腹腔后进入腹腔,挑出左侧子宫角,剥离系膜,结扎中段子宫角部分及系膜血管,切除结扎处子宫角约12mm,并修去子宫周围多余脂肪,分离肌层与内膜,将其纵行切开,取一段约(0.5乘以0.5)cm  2内膜,令其表面上皮对着右侧腹部血管丰富处,将其四角与腹壁肌肉用4-0铬线缝合固定,用生理盐水冲洗腹腔,子宫断端行端-端吻合术后,关腹,常规消毒。 
 

  2.2 造模的判定及纳入标准。正常清洁饲养一个月,将手术后动物麻醉,开腹观察移植内膜生长的情况,造模成功标准为:移植物形成淡红色或者暗红色囊泡,壁薄,囊泡高度大于等于2mm。移植灶体积增大,呈透明的结节状、囊状、有澄清液体积聚,移植物被结缔组织覆盖并有血管形成,质地软。卵巢囊肿大于30mm以上。 

 

  2.3 实验分组。选取造模成功的wistar大鼠40只,随机分为为5组,每组8只,即散结乳癖膏高剂量组、中剂量组、低剂量组、赋形剂对照组、模型组,另取8只未造模的wistar大鼠作为空白对照组,共计6组。 
 

  2.4 给药剂量及给药途径。散结乳癖膏高剂量组、中剂量组、低剂量组分别给予散结乳癖膏2.52g/kg、1.26g/kg、0.63g/kg,赋形剂对照组给予赋形剂2.52g/kg。试验前用剃毛机将各组大鼠腹部的毛脱掉,脱毛后24小时开始涂抹相应的药物,涂药后敷以油纸和纱布,并用无刺激性透明胶布固定,外罩铁纱网,单笼饲养,以防咬食,每天给药一次。连续6周。 
 

  2.5 取材。末次给药后次日,眼球取血5ml,放入离心机中,以2500r/min离心15min,分离出血清,备用。眼球取血后,用75%乙醇常规消毒腹部皮肤。取一半动物健侧子宫角中段,进行病理学观察,另一半制成组织匀浆备用。 
 

  2.6 指标检测。 
 

  2.6.1 放射免疫法检测血清和组织匀浆雌激素(E2)的含量,具体步骤如下:首先对试管进行标号:T(总计数)、NSB(非特异结合)、S 0(最大结合)和S  1至S 5、QC(质控品)以及U(样本),然后按如下顺序操作。试管T中加入标记物100ul;试管NSB中分别加入蒸馏水100ul、零标准100ul、标记物100ul;试管S 0中分别加入零标准100ul、标记物100ul、抗体100ul;试管S 1至S 5分别加入标准品100ul、标记物100ul、抗体100ul;试管QC中分别加入质控品100ul、标记物100ul、抗体100ul;试管U中分别加入样本100ul、标记物100ul、抗体100ul。混匀,37℃水浴温育2小时。除试管T外,其余分别加入分离剂500ul。充分混匀,室温放置15分钟,4℃3500r/min,离心20分钟,吸弃上清(T管除外),沉淀物计数1分钟,在计数器上测定各管沉淀的放射性计数。 

 

  2.6.2 放射免疫法检测血清和组织匀浆孕激素(P)的含量,具体步骤如下:首先对试管进行标号:T(总计数)、NSB(非特异结合)、S  0(最大结合)和S 1至S 5、QC(质控品)以及U(样本),然后按如下顺序操作。试管T中加入标记物100ul;试管NSB中分别加入零标准200ul、标记物100ul;试管S  0中分别加入零标准100ul、标记物100ul、抗体100ul;试管S 1至S 5分别加入标准品100ul、标记物100ul、抗体100ul;试管QC中分别加入质控品100ul、标记物100ul、抗体100ul;试管U中分别加入样本100ul、标记物100ul、抗体100ul。混匀,37℃水浴温育1小时。除试管T外,其余分别加入分离剂500ul。充分混匀,室温放置15分钟,4℃3500r/min,离心20分钟,吸弃上清(T管除外),沉淀物计数1分钟,在计数器上测定各管沉淀的放射性计数。 
 

  2.7 统计学处理。应用SPSS17.0统计分析软件进行统计学分析,实验结果以均数±标准差(x±s)表示,t检验进行组间差异的比较,显着性差异水平以0.05和0.01为标准。 

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